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50元胡道地炮制方法的工艺研究----高小恒

更新时间:2019-10-14 10:05点击:

  50.元胡道地炮制方法的工艺研究----高小恒_冶金/矿山/地质_工程科技_专业资料。元胡道地炮制方法的工艺研究 高小恒 1,刘效栓 1,李喜香 1,徐杰 2 1.甘肃省中医院,甘肃 兰州 730050 730000 2.甘肃省药品检验研究院,甘肃 兰州 摘要:目的 优选出最佳的道地

  元胡道地炮制方法的工艺研究 高小恒 1,刘效栓 1,李喜香 1,徐杰 2 1.甘肃省中医院,甘肃 兰州 730050 730000 2.甘肃省药品检验研究院,甘肃 兰州 摘要:目的 优选出最佳的道地炮制工艺。方法 采用正交试验和综合加权评分法,以元胡 中延胡索乙素和元胡浸出物得率为考察指标,对影响元胡道地炮制工艺的因素进行考察。 结 果 元胡的最佳道地炮制工艺条件为煮制温度 90℃, 煮制 5.5h, 加米醋量为 20%。 结论 经 试验验证,最终所选的元胡的最佳道地炮制工艺合理。 关键词:元胡;道地炮制;正交试验设计 元胡即延胡索,为罂粟科植物延胡索 Corydalis yanhusuo W.T.Wang 的干燥块茎,作 为“浙八位”之一,其具有活血、行气、止痛之功效,其主要药用成份为延胡索乙素,游离 的延胡索乙素难溶于水,经醋炮制后其与醋酸形成易容与水的盐,益于煎出,从而提高元胡 的药效。 《中国药典》 2010 版记载的元胡的炮制方法有醋炙法和醋煮法。 作为浙产道地药材, 《浙江省中药炮制规范》2005 版收录的元胡的炮制方法为醋煮法,即醋煮工艺为浙江道地 药材元胡的道地炮制工艺,该法随也见有相关文献的报道,但系统性的研究却很少。本实验 采用正交实验法, 同时结合高效液相色谱法等方法, 以延胡索乙素和元胡浸出物得率为检测 指标, 对元胡的道地炮制工艺即元胡醋煮工艺进行优选, 以期找出最优的元胡道地炮制工艺, 为元胡的进一步研究以及规范中药材的炮制提供指导[1-9]。 1 仪器与材料 Agilent 1200 型高效液相色谱仪 (美国 Agilent 公司) ; 梅特勒 XS-105 电子分析天平 (0.01 mg,METTLER TOLEDO,Switzerland) ,梅特勒 AL-204 电子分析天平(0.01 g,METTLER TOLEDO,Switzerland) ,电热恒温水浴锅(天津市泰斯特仪器有限公司) ,KQ-500DB 型超 声清洗器(昆山市超声仪器有限公司) ,TGL-16B 高速台式离心机(江苏联创医药技术有限 公司) 、MB45 卤素水分测定仪(奥豪斯国际贸易(上海)有限公司) ,DFT-200 手提式高速 中药粉碎机(温岭市林大机械有限公司制造) ,DHG 型电热恒温鼓风干燥箱(上海一恒科技 有限公司) 。 元胡原药材来自浙江省东阳、永康、缙云、磐安等地,经浙江中医药大学中药饮片有限 公 司 郑 建 宝 主 管 中 药 师 鉴 定 为 罂 粟 科 (Papaveraceae) 荷 包 丹 亚 科 紫 堇 属 植 物 延 胡 索 (Corydalis yanhusuo W. T. Wang)的干燥块茎。 延胡索乙素(购自中国药品生物制品检定所,批号:11) ;浓氨水、磷酸、 三乙胺为分析纯;分析纯甲醇和色谱纯甲醇;水为哇哈哈纯净水;精密 pH 试纸 5.5-9.0(上 海三爱思试剂有限公司,Q/GHSC:1571-2006) ;米醋(杭州市西湖酱醋厂) 。 2 试验方法及结果 2.1 指标成分的测定 2.1.1 色谱条件 Agilent Eclipse XDB-C18(4.6×250mm,5μm)色谱柱,二极管阵列检 测器(DAD) ,以甲醇(A)-0.1%磷酸溶液(B) (三乙胺调 pH 值至 6.0)为流动相,等度 洗脱(A:B=65:35) ,流速为 1ml/min,检测波长 280nm,柱温 30℃,进样量 10?l。延胡索 乙素、元胡生品以及炮制品的色谱图见图 1。 2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取延胡索乙素 1.43mg 于 10ml 容量瓶中,加入甲醇溶解 并稀释至刻度,摇匀,即得对照品溶液。 2.1.3 供试品溶液的制备 平行取洁净元胡生品 9 份,每份 50g,按表 1 实验安排进行正交 实验。精密称取过 50 目的元胡炮制品粉末 0.5g,置锥形瓶中,加入浓氨水—甲醇(1:20) 混合液 50ml,称定重量,冷浸 1 小时后加热回流 1 小时,放冷,用浓氨水—甲醇混合液补 足减少的重量,摇匀,过滤。精密量取续滤液 25ml,蒸干,加甲醇溶解残留物,定容至 5ml 量瓶中,摇匀,高速离心,取上清液即得实验所需供试品。 2.1.4 方法学考察 精密吸取对照品溶液 10 μL,连续 6 次进样,记录 HPLC 色谱图。结 果显示,延胡索乙素的色谱峰面积的 RSD 小于 1.3%,表明仪器精密度良好。 平行称取某一炮制条件下元胡炮制品粉末 6 份,每份 1 g,按“2.1.3”项下方法制备供 试液,以“2.1.1”项下色谱条件进样,重复进样 6 次,记录 HPLC 色谱图。延胡索乙素色 谱峰含量的 RSD 小于 1.5%,证明重复性良好。 取同一供试品溶液,分别在 0、2、4、6、8、10、12、24 h 进行 HPLC 色谱分析。延胡 索的色谱峰峰面积的 RSD 小于 1.5%,显示供试品溶液在 24 h 内稳定。 精密移取以“2.1.3”项下方法制备的已测定的供试品溶液,平行取样 6 份,每份 1 mL, 精密加入对照品溶液适量,测定加样回收率,结果延胡索乙素的加样回收率分别为 99.43%, RSD 分别为 0.47%。 A 延胡索乙素 B 延胡索乙素 延胡索乙素 C 图 1 生品元胡样品(A) ,炮制品元胡品(B)和延胡索乙素标准品(C)的 HPLC 图谱 Fig. 1 HPLC chromatograms of the raw samples (A)、the processing samples(B)and reference substance(C) 2.2 浸出物得率的测定 精密称取经正交实验方法炮制的元胡粗粉 4 g, 置 250 mL 的锥形瓶中, 精密加水 100 mL, 密塞,称定质量,静置 1 h 后,加热回流,并保持微沸 1 h,放冷后,称定质量,用水补足 减失的质量,摇匀,滤过,精密量取滤液 25 mL,置已干燥至恒定质量的蒸发皿中,在水浴 上蒸干后,于 105 ℃干燥 3 h,置干燥器中冷却 30 min,迅速精密称定质量,并记下数值。 2.3 正交实验优选元胡道地炮制工艺 2.3.1 实验设计 以预试验中单因素考察的结果为依据, 设计正交实验对元胡的道地炮制工 艺进行优选。选用加醋量(A) 、煮制温度(B) 、煮制时间(C)为考擦因素,每个因素设 3 个水平, 以文中所述元胡主要药效成分延胡索乙素的质量分数和浸出物得率为评价指标, 以 L9(34) 安排实验,因素水平见表 1。 表1 L9(34) 正交实验设计及结果 B/℃ 60(1) 80(2) 90(3) 60(1) 80(2) 90(3) 60(1) 80(2) 90(3) 283.55 286.63 281.60 3.08 C/ h 4(1) 5.5(2) 6(3) 5.5(2) 6(3) 4(1) 6(3) 4(1) 5.5(2) 283.43 281.31 287.05 5.74 D(空白) 综合得分 (1) (2) (3) (3) (1) (2) (2) (3) (1) 282.90 284.49 284.39 1.58 92.99 93.84 94.04 94.05 96.49 94.14 96.51 96.30 93.42 Table 1 试验号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Ij IIj IIIj Rj Design and results of L9(34) orthogonal test A/% 20(1) 20(1) 20(1) 40(2) 40(2) 40(2) 70(3) 40(3) 40(3) 280.87 284.68 286.23 5.36 2.3.2 正交试验方案及结果 本实验以元胡中主要药效成分延胡索乙素质量分数为指标同 时结合浸出物测定结果作为考查指标,运用综合加权评分法对正交实验结果进行方差分析。 以 100 分为满分, 延胡索乙素为元胡重要的药用成分, 而浸出物得率不仅能够较全面反应炮 制方法的优劣, 同时能够反应中医用药的整体观, 故设定延胡索乙素与浸出物得率的权重系 数各为 50。以此为基础进行总加权评分,利用综合评分值(Pi)对试验结果进行方差分析: Mij 指代第 i 次实验时延胡索乙素和浸出物得率两个指标成分中第 j 个指标成分的测定值 (Mij 指代正交试验第 i 次实验的色谱图中第 j 个色谱峰含量) ,以其中的最大值作为参照对同一 指标下的数据进行标准化处理,Dij 指代第 j 个指标成分下的第 i 个测定值的标准化数据,Dij =Mij/(Mj)max;其中 i=1,2, …,9;j=1,2, …,4。综合评分 Pi=50×∑Dij,将总分结果带 入正交试验结果中,即得 表 4 方差分析 Table 4 Analysis of variance 方差来源 A B C D (误差) 离均差平方和 19.22 16.20 21.28 2.439 8 自由度 2 2 2 2 F值 9.61 8.10 10.64 显著性 0.05<P<0.1 P>0.05 0.05<P<0.1 注:f=2,F0.1(2, 2)=9.00,F0.05(2, 2)=19.00 在所选因素水平范围内,通过综合加权评分法判定,影响元胡道地炮制工艺的因素依次为 C >A>B,即煮制时间>加醋量>煮制温度,且煮制时间和加醋量对炮制工艺的影响更为显 著(0.05<P<0.1) 。最终选择 A3B2C3 为麸炒白芍的最佳炮制工艺,即加入药材质量 70%的 米醋,在 80 ℃下炒制 6h。 2.3.3 各炮制品中延胡索乙素的含量测定 取延胡索生品 50g,采用优选出的工艺条件分别炮制 3 批,结果性状符合规定要求,延 胡索含量分别为 0.0611%、0.0645%、0.0627%,醇浸出物分别为 15.84%、15.25%、15.59%, 说明优选工艺稳定,可靠。 3 3.1 讨论 评价指标的选择 浸出物作为元胡质量评价的主要指标之一, 也是元胡主要的药效的物质基础, 其得率的 高低不仅代表药物中有效成分量的高低, 同时也反映了中药临床治疗效果的高低。 临床上常 以元胡治疗胸胁、脘腹疼痛、胸痹疼痛、闭经痛经、产后瘀阻、跌扑肿痛,其主要成分延胡 索乙素具有显著的镇痛、催眠、镇静与安定作用。故本实验选用延胡索乙素的质量分数和元 胡浸出物的得率作为主要指标,对元胡的道地炮制工艺即元胡的醋煮工艺进行综合评定, 不 仅可以反映炮制工艺的优劣,也符合中医用药的整体观理论。 3.2 正交因素与水平的选择 通过实验前期的预实验, 考查了影响元胡道地炮制工艺的各因素和水平, 并对其进行了 筛选。醋制元胡是临床较为常用的元胡炮制品,常用以治疗胸胁、脘腹疼痛等症。米醋作为 炮制过程中唯一的辅料, 在对其加入量进行单因素考察时, 发现加醋量的不同对炮制结果有 着不同程度的影响,为了更准确的设定麸皮的量,实验参考 2010 年版《中国药典》以及《浙 江省中药炮制规范》 (2005 版)中的相关要求,同时结合相关研究报道,初步设定了米醋的 加入量为元胡药材量的 20%、40%和 70%。另外,在对煮制温度和煮制时间进行单因素考察 时发现,随着煮制温度的升高,煮制时间的延长,元胡中的延胡索乙素等生物碱会受到不同 程度的破坏;此外米醋的沸点在 70℃左右,随着温度的升高,米醋的挥发加快,不利于延 胡索乙素与醋酸的充分反应, 因此实验中对煮制时间和温度也做了设定, 煮制时间分别控制 在 4、5.5、6 h;煮制温度则控制在 60、80、90 ℃下。 3.3 结果分析 本实验以元胡中的延胡索乙素的质量分数和浸出物得率作为检测指标, 对元胡的道地炮 制工艺进行优化,首次采用道地药材产地特有的道地方法进行炮制,设计思路新颖,对规范 药材的生产和炮制工艺具有指导性意义。此外,优化后的炮制工艺结果稳定可靠,可为进一 步开发和利用元胡提供重要依据。 参考文献 [1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典: 一部[S]. 北京: 中国医药科技出版社, 2010:130. 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